Samuel Leroy Jackson nasceu em 21 de dezembro de 1948, na cidade de Washington (EUA). Saiu da capital muito cedo e foi para a cidade de Chattanooga, no Tennessee para morar com sua mão, Elizabeth Jackson. Seu pai, que viu só duas vezes na vida, morreu de alcoolismo. Estudou na escola Riverside High, um ambiente de segregação racial, onde tocou trompete e trompa. Fez faculdade em Atlanta, inicialmente para o curso de arquitetura, mas acabou se formando em artes em 1972.
Atuou em diversas peças de teatro na década de 70, sendo esse o foco principal da sua carreira. Em 1977 e 1978, fez pequenas aparições em filmes feitos para a TV norte-americana, além de outras pontas no início da década de 80. Sua carreira mudaria definitivamente ao ser apresentado para o diretor Spike Lee. Dirigido por ele participou dos filmes Lute Pela Coisa Certa e Faça a Coisa Certa. Daí em diante não parou mais os trabalhos para o cinema.
Mas ao final da década de 80 mergulhou no vício, em especial cocaína. Sua carreira começou a fica em segundo plano até que precisou ser internado em uma clínica de reabilitação em Nova York. Aos terminar a reabilitação, por ironia, interpretou um viciado em crack e cocaína no filme Febre da Selva, em 1991.
Em 1994 atingiu o ápice de sua carreira, no filme Pulp Fiction – Tempo de Violência. Dirigido por Quentin Tarantino, recebeu uma indicação ao Oscar e ao Globo de Ouro por sua atuação. Ainda na década de 90 participou de diversas outras produções de sucesso como Jurassic Park – Parque dos Dinossauros, Duro de Matar – A Vingança, Tempo de Matar e Jackie Brown.
Mantendo uma média de quase cinco filmes por ano, esteve presente na trilogia Star Wars, em Kill Bill 2, Serpentes à Bordo, XXX, Corpo Fechado e Shaft. Se somássemos as bilheterias dos seus quase 70 filmes, Samuel L. Jackson é o ator que mais arrecadou dinheiro na história do cinema. Foram US$ 7,42 bilhões em renda. Quatro vezes mais do que a bilheteria de Titanic, que foi de US$ 1,8 bilhões.
Carismático e considerado um astro “pop”, Jackson é fã de basquetebol, torcedor do Toronto Raptors, e simpatizante de futebol, sendo torcedor do Liverpool. Mas, nas horas de lazer, gosta de praticar golfe. Casado com Latanya Richardson desde 1980, Samuel é calvo, embora goste de usar perucas em seus filmes. É vegetariano e atualmente mora em Los Angeles.